TÌM HIỂU QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VÀ ĐỊNH GENOTYPE VI RÚT VIÊM GAN C (HCV) BẰNG KỸ THUẬT REALTIME PCR TẠI BỆNH VIỆN 175

Bệnh viêm gan siêu vi do vi rút viêm gan C (Hepatitis C virus – HCV) là bệnh rất nguy hiểm và là tác nhân gây viêm gan chuyển sang dạng mạn tính có tần suất rất cao đến 70-80%. Khoảng 20-30% các trường hợp viêm gan C mạn tính có thể tiến triển thành xơ gan hoặc ung thư gan. Ở nhiều nước, HCV là tác nhân chính gây ung thư gan. Theo nhiều nghiên cứu trước đây thì các type của HCV gây ra các mức độ bệnh khác nhau và sự khác biệt về hiệu quả điều trị bằng interferon. Việc xác định đúng type di truyền sẽ giúp cho nghiên cứu dịch tễ học nhiễm HCV và định lượng phác đồ điều trị, đồng thời là cơ sở cho những nghiên cứu hoàn thiện sinh phẩm chẩn đoán và sản xuất các vaccin phòng ngừa trong tương lai. Chính vì những nguyên nhân trên, đề tài “Tìm hiểu quy trình định lượng và định genotype vi rút viêm gan C (HCV) bằng kỹ thuật real-time PCR tại bệnh viện 175”

Phương pháp nghiên cứu: Đây là một nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật real-time PCR để định lượng và định genotype HCV trong huyết thanh của bệnh nhân, phát hiện và định lượng, định genotype HCV để tiên lượng phác đồ điều trị thích hợp. Thống kê số liệu về số ca nhiễm và xác định genotype các ca đã bị nhiễm HCV tại bệnh viện 175.

Kết quả nghiên cứu: Kỹ thuật real-time PCR phát hiện 32% trường hợp dương tính với RNA-HCV. Có 3 ca nhiễm genotype 1, có 1 ca nhiễm genotype 6. Kỹ thuật real-time RT-PCR là kỹ thuật nhạy và đặc hiệu để chẩn đoán phát hiện, định lượng và định genotype HCV.

NỘI DUNG:

Lời cảm ơn i

Tóm tắt ii

Summary iii

Danh mục các chữ viết tắt iv

Danh mục các bảng v

Danh mục các hình ảnh vi

Chương 1 MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt vấn đề 1

1.2. Yêu cầu đề tài 2

1.3. Nội dung thực hiện 2

Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1. Bệnh viêm gan do vi rút viêm gan C (Hepatitis C Virus, HCV) 3

2.1.1. Lịch sử phát hiện bệnh viêm gan C 3

2.1.2. Dịch tễ học bệnh viêm gan C 3

2.1.3. Dịch tễ học phân tử vi rút viêm gan C 5

2.2. Vi rút viêm gan C (HCV) 6

2.2.1. Cấu trúc HCV 6

2.2.2. Genomee của HCV 6

2.2.3. Genotype và khái niệm “quasi-spesiec” HCV 9

2.3. Các phương pháp định lượng HCV 10

2.3.1. Phương pháp bDNA (branched DNA) 10

2.3.2. PCR định lượng cạnh tranh (quantitative competitive PCR) 11

2.4. Phương pháp real-time RT-PCR 11

2.4.1. Phản ứng RT (reverse transcription) 11

2.4.2. Phương pháp real-time PCR 12

2.4.3. Một số khái niệm dùng trong định lượng real-time PCR 17

2.5. Định genotype HCV 18

2.5.1. Phương pháp lai phân tử (Inno Lipa) 18

2.5.2. Phương pháp RFLP (restriction fragment length polymorphism) 18

2.5.3. Phương pháp giải trình tự 18

2.5.4. Định genotype bằng phương pháp real-time PCR 20

Chương 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 21

3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu 21

3.2. Vật liệu 21

3.2.1. Đối tượng và số lượng mẫu 21

3.2.2. Mồi và mẫu dò 21

3.2.3. Vật liệu và hóa chất dùng để tách chiết RNA 21

3.2.4. Vật liệu và hóa chất dùng cho phản ứng RT 22

3.3.5. Vật liệu và hóa chất dùng cho xây dựng đường chuẩn định lượng 22

3.2.6. Vật liệu và hóa chất dùng cho phản ứng real-time PCR 22

3.2.7. Vật liệu và hóa chất dùng cho phản ứng xác định genotype HCV 22

3.2.8. Thiết bị và dụng cụ 23

3.3. Phương pháp nghiên cứu và kỹ thuật nghiên cứu 23

3.3.1. Phương pháp nghiên cứu 23

3.3.2. Kỹ thuật nghiên cứu 23

3.3.3. Lấy máu và ly trích huyết thanh 24

3.3.4. Phương pháp tách chiết RNA 24

3.3.5. Phương pháp real-time RT-PCR 25

3.3.5.1. Phương pháp RT 25

3.3.5.2. Phương pháp real-time PCR định lượng HCV 26

3.3.5.3. Phương pháp real-time PCR định genotype HCV 28

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30

4.1. Kết quả chạy real-time RT-PCR 30

4.1.1. Phân tích kết quả mẫu dương tính 30

4.1.1.1. Mẫu dương tính cao 30

4.1.1.2. Mẫu dương tính trung bình 31

4.1.1.3. Mẫu dương tính yếu 32

4.1.2. Phân tích kết quả mẫu dương tính dưới ngưỡng 33

4.1.3. Phân tích kết quả mẫu âm tính 34

4.1.4. Mẫu ức chế 35

4.2. Phân tích kết quả mẫu chạy genotype HCV 35

4.2.1. Genotype 1 36

4.2.2. Genotype 6 37

4.3. Tình hình nhiễm HCV tại bệnh viện 175 38

4.4. Kết quả xác định genotype HCV 39

Chương 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41

5.1. Kết luận 41

5.2. Kiến nghị 41

TÀI LIỆU THAM KHẢO 42

LINK DOWNOAD (WORD)

LINK DOWNLOAD (PDF)