Đánh giá khả năng sản xuất gonadotropin màng đệm ngựa (eCG, Equine Chorionic Gonadotropin) chuỗi đơn dòng tế bào HEK-293

Chinese hamster ovary (CHO) cells là một dòng tế bào biểu mô có nguồn gốc từ buồng trứng của chuột lang Trung Quốc, thường được sử dụng trong nghiên cứu sinh học, y học và thương mại trong sản xuất protein điều trị. Nó đã được sử dụng rộng rãi trong các nghiên cứu về di truyền, sàng lọc độc tính, dinh dưỡng và biểu hiện gen, đặc biệt là để biểu hiện các protein tái tổ hợp. Tế bào CHO là vật chủ phổ biến nhất của động vật có vú để sản xuất công nghiệp các phương pháp điều trị protein tái tổ hợp. Tuy nhiên trong quá trình nuôi cấy, tỷ lệ tế bào chết cao (dự án muốn tìm 1 dòng tế bào mới có khả năng sản sinh ra hormone). Vì vậy trong nghiên cứu này chúng tôi sẽ sử dụng dòng tế bào HEK 293 để theo dõi các đặc điểm sinh học của eCG chuỗi đơn tái tổ hợp.

2. Mục tiêu nghiên cứu

Mục tiêu nghiên cứu của đề tài là đánh giá khả năng sản xuất gonadotropin màng đệm ngựa (Equine chorionic gonadotropin) chuỗi đơn của dòng tế bào HEK 293.

NỘI DUNG:

MỞ ĐẦU ........................................................................................................... 1

1. Lý do chọn đề tài ..................................................................................... 1

2. Mục tiêu nghiên cứu ................................................................................ 3

3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài ................................................. 3

4. Cấu trúc luận văn ..................................................................................... 3

5. Những đóng góp mới của đề tài............................................................... 4

Chương 1: TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU ................................ 5

1.1. Tổng quan về hormone gonadotropin .................................................. 5

1.1.1. Hormone kích thích nang trứng (Follicle-stimulating hormone,

FSH) ........................................................................................................ 6

1.1.2. Hormone tạo hoàng thể (Luteinizing hormone, LH) ..................... 6

1.1.3. . Gonadotropin màng đệm ở người (Human chorionic gonadotropin,

hCG) ............................................................................................................ 7

1.2. Tổng quan về eCG ................................................................................ 7

1.2.1. Nguồn gốc và cấu trúc của eCG .................................................... 7

1.2.1.1. Nguồn gốc của eCG .................................................................... 7

1.2.1.2. Cấu trúc của eCG ....................................................................... 9

1.2.2. Hoạt động sinh học của eCG ....................................................... 11

1.2.3. Ứng dụng của eCG trong hỗ trợ sinh sản .................................... 12

1.3. Tình hình sử dụng eCG trong hỗ trợ sinh sản ở động vật .................. 15

1.4. Tế bào HEK 293 (Human Embryonic Kidney 293) ........................... 21

1.4.1. Nguồn gốc của HEK 293 .............................................................. 21

1.4.2. Ứng dụng của HEK 293 ............................................................... 24

Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP....................... 27

2.1. Đối tượng nghiên cứu ........................................................................... 27

2.2. Hóa chất và thiết bị ............................................................................... 27

2.3. Nội dung nghiên cứu ............................................................................. 28

2.4. Phương pháp nghiên cứu ...................................................................... 28

2.4.1. Nuôi cấy tế bào ............................................................................... 28

2.4.2. Theo dõi và cấy truyền tế bào ......................................................... 28

2.4.4. Phương pháp chuyển nạp gen vào tế bào HEK 293 ....................... 30

2.4.5. Phương pháp xác định nồng độ cAMP ........................................... 31

2.4.6. Phương pháp xét nghiệm ELISA “Sandwich” ................................ 31

2.4.7. Phương pháp xử lý số liệu .............................................................. 32

Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ......................................................... 33

3.1. Tỷ lệ sống của tế bào HEK sau khi rã đông từ -196°C......................... 33

3.2. Khả năng sản xuất eCG tái tổ hợp của tế bào HEK 293 trong môi

trường có bổ sung protein. ........................................................................... 37

3.3. Khả năng sản xuất eCG tái tổ hợp của tế bào HEK 293 trong môi

trường không có bổ sung protein. ................................................................ 41

3.4. Xác định đặc tính sinh học của eCG tái tổ hợp thông qua nồng độ

cAMP nội bào. ............................................................................................. 43

3.5. Ảnh hưởng của eCG đến tỷ lệ sống của tế bào Leydig mLTC-1 trong

quá trình nuôi cấy in vitro. ........................................................................... 47

KẾT LUẬN ..................................................................................................... 50

1. KẾT LUẬN ............................................................................................... 50

2. KIẾN NGHỊ .............................................................................................. 51

DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO ........................................................ 52

QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN THẠC SĨ (Bản sao)

LƯU Ý:

Tài liệu được chia sẻ bởi CTV EBOOKBKMT "Mân Trần Lê" chỉ được dùng phục vụ mục đích học tập và nghiên cứu.

LINK DOWNLOAD

2. Mục tiêu nghiên cứu

Mục tiêu nghiên cứu của đề tài là đánh giá khả năng sản xuất gonadotropin màng đệm ngựa (Equine chorionic gonadotropin) chuỗi đơn của dòng tế bào HEK 293.

NỘI DUNG: