PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN CHUYỂN HÓA NITO TRONG CHẤT THẢI AO CÁ TRA VÀ TRẠI HEO
PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN CHUYỂN HÓA NITO TRONG CHẤT THẢI AO CÁ TRA VÀ TRẠI HEO
NỘI DUNG:
TÓM LƢỢC .................................................................................................................... i
ABSTRACT ................................................................................................................... ii
MỤC LỤC ..................................................................................................................... iii
DANH SÁCH BẢNG .................................................................................................... vi
DANH SÁCH HÌNH ................................................................................................... viii
TỪ VIẾT TẮT ................................................................................................................ x
Chƣơng I. GIỚI THIỆU.................................................................................................. 1
1.1. Đặt vấn đề ....................................................................................................... 1
1.2. Mục tiêu đề tài ................................................................................................ 2
Chƣơng II. LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU ............................................................................ 3
2.1. Tình hình ni cá tra, chăn nuôi heo ở thành phố Cần Thơ năm 2010 .......... 3
2.2. Sự ơ nhiễm nitơ, tình hình ơ nhiễm do nuôi cá tra và chăn nuôi heo ............. 4
2.3. Chu trình nitơ .................................................................................................. 6
2.4. Vi khuẩn chuyển hóa nitơ ............................................................................... 9
2.4.1. Vi khuẩn nitrate hóa ............................................................................ 9
2.4.2. Vi khuẩn khử nitrate ............................................................................ 9
2.5. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng vi khuẩn chuyển hóa nitơ ..................... 10
2.5.1. Nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới ............................................... 10
2.5.2. Nghiên cứu và ứng dụng trong nƣớc................................................. 13
2.6. Nhận diện vi khuẩn bằng kỹ thuật sinh học phân tử ..................................... 14
2.6.1. Trình tự 16S rRNA............................................................................ 14
2.6.2. Mồi và cặp mồi tổng ......................................................................... 14
2.6.3. Kỹ thuật PCR .................................................................................... 15
2.6.4. Kỹ thuật giải trình tự DNA ............................................................... 16
2.6.5. Cơng cụ BLAST ................................................................................ 17
2.6.6. Phân tích phát sinh loài ..................................................................... 17
Chƣơng III. PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ......................... 19
3.1. Thời gian và địa điểm ................................................................................... 19
3.1.1. Thời gian ........................................................................................... 19
3.1.2. Địa điểm ............................................................................................ 19
3.2. Phƣơng tiện nghiên cứu ................................................................................ 19
3.2.1. Nguyên vật liệu ................................................................................. 19
3.2.2. Dụng cụ, thiết bị ................................................................................ 19
3.2.3. Hóa chất............................................................................................. 21
3.3. Phƣơng pháp nghiên cứu .............................................................................. 22
3.3.1. Thu và bảo quản mẫu chất thải ......................................................... 22
3.3.2. Phân tích mẫu chất thải ..................................................................... 23
3.3.3. Phƣơng pháp xử lý số liệu ................................................................. 24
3.3.4. Phân lập vi khuẩn chuyển hóa nitơ ................................................... 24
3.3.5. Khảo sát khả năng chuyển hóa nitơ .................................................. 27
3.3.6. Tuyển chọn dịng vi khuẩn có khả năng chuyển hóa nitơ cao .......... 28
3.3.7. Nhận diện vi khuẩn ........................................................................... 29
3.3.8. Phân tích quan hệ di truyền ............................................................... 32
Chƣơng IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.................................................................. 33
4.1. Kết quả thu mẫu chất thải ............................................................................. 33
4.2. Mật số vi khuẩn chuyển hóa nitơ trong hai loại chất thải ............................. 33
4.2.1.Mật số vi khuẩn chuyển hóa nitơ trong chất thải ao cá tra ................ 34
4.2.1.Mật số vi khuẩn chuyển hóa nitơ trong chất thải trại heo .................. 35
4.3. Giá trị pH của hai loại chất thải .................................................................... 35
4.4. Kết quả phân lập vi khuẩn chuyển hóa nitơ .................................................. 36
4.5. Đặc điểm hình thái khuẩn lạc các dịng vi khuẩn phân lập .......................... 38
4.5.1. Đặc điểm khuẩn lạc vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra ............ 38
4.5.2. Đặc điểm khuẩn lạc vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ............. 38
4.6. Đặc điểm hình thái tế bào các dòng vi khuẩn phân lập ................................ 43
4.6.1. Đặc điểm tế bào vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra ................. 43
4.6.2. Đặc điểm tế bào vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ................... 44
4.7. Khả năng chuyển hóa nitơ của vi khuẩn phân lập từ hai loại chất thải ........ 45
4.7.1. Khả năng oxi hóa ammonium của vi khuẩn phân lập từ chất thải ao
cá tra ............................................................................................................ 45
4.7.2. Khả năng khử nitrite của vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra .... 46
4.7.3. Khả năng khử nitrate của vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra ... 47
iv
4.7.4. Khả năng chuyển hóa nitơ của vi khuẩn T phân lập từ chất thải ao
cá tra ............................................................................................................ 48
4.7.5. Khả năng chuyển hóa nitơ của vi khuẩn T phân lập từ chất thải trại
heo ............................................................................................................... 48
4.7.6. Khả năng oxi hóa ammonium của vi khuẩn phân lập từ chất thải trại
heo ............................................................................................................... 49
4.7.7. Khả năng khử nitrite của vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ..... 50
4.7.8. Khả năng khử nitrate của vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ..... 51
4.8. Tuyển chọn dịng vi khuẩn có khả năng chuyển hóa nitơ cao ...................... 52
4.9. Nhận diện dịng vi khuẩn có khả năng chuyển hóa nitơ cao ........................ 53
4.9.1. Kết quả điện di sản phẩm PCR ......................................................... 53
4.9.2. Kết quả giải trình tự và nhận diện vi khuẩn ...................................... 54
4.10. Phân tích quan hệ di truyền các dòng vi khuẩn đƣợc nhận diện................. 60
4.10.1. Quan hệ di truyền của vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra ...... 60
4.10.2. Quan hệ di truyền của vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ........ 61
Chƣơng V. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ................................................................... 64
5.1. Kết luận ......................................................................................................... 64
5.2. Kiến nghị ....................................................................................................... 64
TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................................ 65
PHỤ CHƢƠNG
PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN CHUYỂN HÓA NITO TRONG CHẤT THẢI AO CÁ TRA VÀ TRẠI HEO
NỘI DUNG:
TÓM LƢỢC .................................................................................................................... i
ABSTRACT ................................................................................................................... ii
MỤC LỤC ..................................................................................................................... iii
DANH SÁCH BẢNG .................................................................................................... vi
DANH SÁCH HÌNH ................................................................................................... viii
TỪ VIẾT TẮT ................................................................................................................ x
Chƣơng I. GIỚI THIỆU.................................................................................................. 1
1.1. Đặt vấn đề ....................................................................................................... 1
1.2. Mục tiêu đề tài ................................................................................................ 2
Chƣơng II. LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU ............................................................................ 3
2.1. Tình hình ni cá tra, chăn nuôi heo ở thành phố Cần Thơ năm 2010 .......... 3
2.2. Sự ơ nhiễm nitơ, tình hình ơ nhiễm do nuôi cá tra và chăn nuôi heo ............. 4
2.3. Chu trình nitơ .................................................................................................. 6
2.4. Vi khuẩn chuyển hóa nitơ ............................................................................... 9
2.4.1. Vi khuẩn nitrate hóa ............................................................................ 9
2.4.2. Vi khuẩn khử nitrate ............................................................................ 9
2.5. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng vi khuẩn chuyển hóa nitơ ..................... 10
2.5.1. Nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới ............................................... 10
2.5.2. Nghiên cứu và ứng dụng trong nƣớc................................................. 13
2.6. Nhận diện vi khuẩn bằng kỹ thuật sinh học phân tử ..................................... 14
2.6.1. Trình tự 16S rRNA............................................................................ 14
2.6.2. Mồi và cặp mồi tổng ......................................................................... 14
2.6.3. Kỹ thuật PCR .................................................................................... 15
2.6.4. Kỹ thuật giải trình tự DNA ............................................................... 16
2.6.5. Cơng cụ BLAST ................................................................................ 17
2.6.6. Phân tích phát sinh loài ..................................................................... 17
Chƣơng III. PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ......................... 19
3.1. Thời gian và địa điểm ................................................................................... 19
3.1.1. Thời gian ........................................................................................... 19
3.1.2. Địa điểm ............................................................................................ 19
3.2. Phƣơng tiện nghiên cứu ................................................................................ 19
3.2.1. Nguyên vật liệu ................................................................................. 19
3.2.2. Dụng cụ, thiết bị ................................................................................ 19
3.2.3. Hóa chất............................................................................................. 21
3.3. Phƣơng pháp nghiên cứu .............................................................................. 22
3.3.1. Thu và bảo quản mẫu chất thải ......................................................... 22
3.3.2. Phân tích mẫu chất thải ..................................................................... 23
3.3.3. Phƣơng pháp xử lý số liệu ................................................................. 24
3.3.4. Phân lập vi khuẩn chuyển hóa nitơ ................................................... 24
3.3.5. Khảo sát khả năng chuyển hóa nitơ .................................................. 27
3.3.6. Tuyển chọn dịng vi khuẩn có khả năng chuyển hóa nitơ cao .......... 28
3.3.7. Nhận diện vi khuẩn ........................................................................... 29
3.3.8. Phân tích quan hệ di truyền ............................................................... 32
Chƣơng IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.................................................................. 33
4.1. Kết quả thu mẫu chất thải ............................................................................. 33
4.2. Mật số vi khuẩn chuyển hóa nitơ trong hai loại chất thải ............................. 33
4.2.1.Mật số vi khuẩn chuyển hóa nitơ trong chất thải ao cá tra ................ 34
4.2.1.Mật số vi khuẩn chuyển hóa nitơ trong chất thải trại heo .................. 35
4.3. Giá trị pH của hai loại chất thải .................................................................... 35
4.4. Kết quả phân lập vi khuẩn chuyển hóa nitơ .................................................. 36
4.5. Đặc điểm hình thái khuẩn lạc các dịng vi khuẩn phân lập .......................... 38
4.5.1. Đặc điểm khuẩn lạc vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra ............ 38
4.5.2. Đặc điểm khuẩn lạc vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ............. 38
4.6. Đặc điểm hình thái tế bào các dòng vi khuẩn phân lập ................................ 43
4.6.1. Đặc điểm tế bào vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra ................. 43
4.6.2. Đặc điểm tế bào vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ................... 44
4.7. Khả năng chuyển hóa nitơ của vi khuẩn phân lập từ hai loại chất thải ........ 45
4.7.1. Khả năng oxi hóa ammonium của vi khuẩn phân lập từ chất thải ao
cá tra ............................................................................................................ 45
4.7.2. Khả năng khử nitrite của vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra .... 46
4.7.3. Khả năng khử nitrate của vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra ... 47
iv
4.7.4. Khả năng chuyển hóa nitơ của vi khuẩn T phân lập từ chất thải ao
cá tra ............................................................................................................ 48
4.7.5. Khả năng chuyển hóa nitơ của vi khuẩn T phân lập từ chất thải trại
heo ............................................................................................................... 48
4.7.6. Khả năng oxi hóa ammonium của vi khuẩn phân lập từ chất thải trại
heo ............................................................................................................... 49
4.7.7. Khả năng khử nitrite của vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ..... 50
4.7.8. Khả năng khử nitrate của vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ..... 51
4.8. Tuyển chọn dịng vi khuẩn có khả năng chuyển hóa nitơ cao ...................... 52
4.9. Nhận diện dịng vi khuẩn có khả năng chuyển hóa nitơ cao ........................ 53
4.9.1. Kết quả điện di sản phẩm PCR ......................................................... 53
4.9.2. Kết quả giải trình tự và nhận diện vi khuẩn ...................................... 54
4.10. Phân tích quan hệ di truyền các dòng vi khuẩn đƣợc nhận diện................. 60
4.10.1. Quan hệ di truyền của vi khuẩn phân lập từ chất thải ao cá tra ...... 60
4.10.2. Quan hệ di truyền của vi khuẩn phân lập từ chất thải trại heo ........ 61
Chƣơng V. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ................................................................... 64
5.1. Kết luận ......................................................................................................... 64
5.2. Kiến nghị ....................................................................................................... 64
TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................................ 65
PHỤ CHƢƠNG


.png)
%20(1).png)
.png)
.png)
.png)



Không có nhận xét nào: