Nghiên cứu biểu hiện kháng thể nanobody kháng her2 trong tế bào động vật hek293 (Vũ Thị Phượng)
14 thg 4, 2025 | 22:29

Nghiên cứu biểu hiện kháng thể nanobody kháng her2 trong tế bào động vật hek293 (Vũ Thị Phượng)



CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 3

1.1. UNG THƯ VÚ

1.1.1. Khái niệm 3

1.1.2. Dịch tễ 3

1.1.3. Các yếu tố nguy cơ 4

1.1.4. Phân loại 7

1.1.5. Điều trị 9

1.2. K HÁNG NGUYÊN HER2

1.2.1. Khái quát về gen her2 và kháng nguyên HER2 9

1.2.2. Cấu trúc của gen her2 và protein HER2 10

1.2.2.1. Cấu trúc gen her2 10

1.2.2.2. Cấu trúc protein HER2 10

1.2.3. Mô hình cơ chế gây UTV của gen her2 13

1.2.4. Thuốc điều trị ung thư vú với mục tiêu lâm sàng là HER2 14

1.3.


K

HÁI QUÁT CHUNG V

Ề

KHÁNG TH

Ể

VÀ KHÁNG TH

Ể

L

Ạ

C ĐÀ

16

1.3.1. Kháng thể lạc đà 17

1.3.2. Cấu trúc của nanobody 18

1.3.3. Ưu điểm của nanobody 20

1.3.4. Ứng dụng của nanobody 20

CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23

2.1. ĐỐ

24

2.2.1. Nhân dòng gen Nb-antiHER2 25

2.2.1.1. Nhân bản gen Nb-antiHER2 bằng kỹ thuật PCR 25

2.2.1.2. Điện di ADN trên gel Agarose 26

2.2.1.3. Tinh sạch sản phẩm PCR 26

2.2.1.4. Phản ứng gắn gen Nb-antiHER2 vào vector pCR2.1 27

2.2.1.5. Thâm chuyển ADN plasmid vào tế bào E. Coli DH5α 27

2.2.1.6. PCR gen Nb – anti HER2 trên khuẩn lạc 28

2.2.1.7. Tinh sạch plasmid 29

2.2.2. Xây dựng cấu trúc vector biểu hiện pEGP-C2 30

2.2.2.1. Tích hợp oligonucleotid 6-histidine vào vector biểu hiện pEGFP – C2 30

2.2.2.2. Cắt vector pEGFP-C2 và plasmid pCR2.1-Nb- anti HER2 bằng enzym

giới hạn 31

2.2.2.3. Tinh sạch sản phẩm cắt giới hạn bằng kit thôi gel Bioneer và gắn gen



mã hóa Nb-antiHER. 32

2.2.3. Thâm chuyển ADN plasmid vào tế bào động vật 33

2.2.3.1. Thâm chuyển pEGFP- Nb - anti HER2 vào tế bào HEK 293 33

2.2.3.2. Kiểm tra gen Nb-antiHER trong tế bào HEK 293 sau khi chuyển gen 34

2.2.4. Phân tích protein thu được 34

2.2.4.1. Phương pháp điện di protein 35

2.2.4.2. Phương pháp Elisa 36

CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ 37

3.1.


N

HÂN DÒNG GEN MÃ HÓA KHÁNG TH

Ể

KHÁNG

HER2 37

3.1.1. Nhân bản gen kháng thể kháng HER2 bằng phương pháp PCR 37

3.1.2. Nhân dòng gen Nb-antiHER2 bằng vector nhân dòng pCR2.1 trong tế bào

vi khuẩn E.coli DH5α 38

3.2.

ĐƯỢC 48

3.4.1 Kiểm tra protein thu được bằng SDS-PAGE 48

3.4.2. Kiểm tra hoạt tính kháng thể thu được bằng phản ứng ELISA 49

CHƯƠNG 4. BÀN LUẬN 51



LINK ĐẶT MUA TÀI LIỆU ONLINE


LINK ĐẶT MUA TÀI LIỆU ONLINE 1


INBOX HỖ TRỢ MUA TÀI LIỆU (90 % GIÁ GỐC)




CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 3

1.1. UNG THƯ VÚ

1.1.1. Khái niệm 3

1.1.2. Dịch tễ 3

1.1.3. Các yếu tố nguy cơ 4

1.1.4. Phân loại 7

1.1.5. Điều trị 9

1.2. K HÁNG NGUYÊN HER2

1.2.1. Khái quát về gen her2 và kháng nguyên HER2 9

1.2.2. Cấu trúc của gen her2 và protein HER2 10

1.2.2.1. Cấu trúc gen her2 10

1.2.2.2. Cấu trúc protein HER2 10

1.2.3. Mô hình cơ chế gây UTV của gen her2 13

1.2.4. Thuốc điều trị ung thư vú với mục tiêu lâm sàng là HER2 14

1.3.


K

HÁI QUÁT CHUNG V

Ề

KHÁNG TH

Ể

VÀ KHÁNG TH

Ể

L

Ạ

C ĐÀ

16

1.3.1. Kháng thể lạc đà 17

1.3.2. Cấu trúc của nanobody 18

1.3.3. Ưu điểm của nanobody 20

1.3.4. Ứng dụng của nanobody 20

CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23

2.1. ĐỐ

24

2.2.1. Nhân dòng gen Nb-antiHER2 25

2.2.1.1. Nhân bản gen Nb-antiHER2 bằng kỹ thuật PCR 25

2.2.1.2. Điện di ADN trên gel Agarose 26

2.2.1.3. Tinh sạch sản phẩm PCR 26

2.2.1.4. Phản ứng gắn gen Nb-antiHER2 vào vector pCR2.1 27

2.2.1.5. Thâm chuyển ADN plasmid vào tế bào E. Coli DH5α 27

2.2.1.6. PCR gen Nb – anti HER2 trên khuẩn lạc 28

2.2.1.7. Tinh sạch plasmid 29

2.2.2. Xây dựng cấu trúc vector biểu hiện pEGP-C2 30

2.2.2.1. Tích hợp oligonucleotid 6-histidine vào vector biểu hiện pEGFP – C2 30

2.2.2.2. Cắt vector pEGFP-C2 và plasmid pCR2.1-Nb- anti HER2 bằng enzym

giới hạn 31

2.2.2.3. Tinh sạch sản phẩm cắt giới hạn bằng kit thôi gel Bioneer và gắn gen



mã hóa Nb-antiHER. 32

2.2.3. Thâm chuyển ADN plasmid vào tế bào động vật 33

2.2.3.1. Thâm chuyển pEGFP- Nb - anti HER2 vào tế bào HEK 293 33

2.2.3.2. Kiểm tra gen Nb-antiHER trong tế bào HEK 293 sau khi chuyển gen 34

2.2.4. Phân tích protein thu được 34

2.2.4.1. Phương pháp điện di protein 35

2.2.4.2. Phương pháp Elisa 36

CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ 37

3.1.


N

HÂN DÒNG GEN MÃ HÓA KHÁNG TH

Ể

KHÁNG

HER2 37

3.1.1. Nhân bản gen kháng thể kháng HER2 bằng phương pháp PCR 37

3.1.2. Nhân dòng gen Nb-antiHER2 bằng vector nhân dòng pCR2.1 trong tế bào

vi khuẩn E.coli DH5α 38

3.2.

ĐƯỢC 48

3.4.1 Kiểm tra protein thu được bằng SDS-PAGE 48

3.4.2. Kiểm tra hoạt tính kháng thể thu được bằng phản ứng ELISA 49

CHƯƠNG 4. BÀN LUẬN 51



LINK ĐẶT MUA TÀI LIỆU ONLINE


LINK ĐẶT MUA TÀI LIỆU ONLINE 1


INBOX HỖ TRỢ MUA TÀI LIỆU (90 % GIÁ GỐC)


M_tả
M_tả

Chuyên mục:

Không có nhận xét nào: