%20(1)%20(1).png)
Nghiên cứu xây dựng quy trình chuyển gen vào bèo tấm Spirodela polyrrhiza thông qua Agrobacterium tumefaciens
.png)
1.2. Mục đích của đề tài
Xõy dựng quy trỡnh chuyển gen vào callus và bèo tấm nguyên cây Spirodela polyrrhiza thông qua Agrobacterium tumefaciens .
1.3. í nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
*Ý nghĩa khoa học: Kết quả của đề tài sẽ cung cấp những dẫn liệu khoa học về khả năng tiếp nhận gen từ Agrobacterium tumefaciens vào loài bèo tấm Spirodela polyrrhiza.
* Ý nghĩa thực tiễn: Là cơ sở ứng dụng để chuyển gen quan tâm vào bèo tấm Spirodela polyrrhiza nhằm sản xuất protein tái tổ hợp.
NỘI DUNG:
PHẦN I. MỞ ĐẦU.................................................................................................1
1.1. Đặt vấn đề.....................................................................................................1
1.2. Mục đích của đề tài.......................................................................................2
1.3. ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài..........................................2
PHẦN II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU.......................................................................4
2.1 Một số đặc điểm sinh học của bèo tấm Spirodela polyrrhiza.................. 4
2.1.1 Hệ thống phân loại......................................................................................4
2.1.2 Đặc điểm hình thái của bèo tấm..................................................................5
2.1.3 Phương thức sinh sản .................................................................................5
2.1.4 Phân bố của bèo tấm....................................................................................6
2.2. Các yếu tố môi trường nuôi cấy ảnh hưởng tới đời sống bèo tấm…..............7
2.3. Các phương pháp chuyển gen vào thực vật...............................................9
2.3.1. Phương pháp chuyển gen trực tiếp............................................................10
2.3.2. phương pháp chuyển gen gián tiếp...........................................................12
2.4. Chuyển gen gián tiếp nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens ...............12
2.4.1. Cấu trúc và chức năng của Ti-plasmid..............................................13
2.4.2. Cấu truc và chức năng của đạn T-DNA............................................14
2.4.3. Cơ chế phân tử của chuyển gen thông qua A.tumefaciens..................15
2.4.4. Hệ thống vectơ chuyển gen..............................................................16
2.5. Tình hình nghiên cứu xây dung hệ thống chuyển gen
vào bèo tấm...........................................................................................................18
2.5.1. Tình hình nghiên cứu thế giới.....................................................................18
2.5.2. Tình hình nghiên cứu trong nước................................................................20
PHẦN III : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU...........................22
3.1. Vật liệu nghiên cứu........................................................................................22
3.1.1. Vật liệu thực vật.........................................................................................22
3.1.2.Vật liệu vi khuẩn và plasmid......................................................................22
3.1.3. Hoá chất và máy móc thiết bị phục vụ cho nghiên cứu...........................23
3.2. Phương pháp nghiên cứu................................................................................24
3.2.1. Xây dựng hệ thống chuyển gen vào bốo tấm S. polyrrhiza......................24
3.2.2. Quan sỏt và xỏc định tỷ lệ biểu hiện tạm thời gen gus……………..…...27
3.2.3. Phương pháp tách chiết DNA bèo tấm……………………………….…27
3.2.4. Phương phỏp phõn tớch PCR…………………………………………….28
3.3. Nội dung nghiên cứu..................................................................................... 29
3.4. Các chỉ tiêu đánh giá......................................................................................31
PHẦN IV : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN...........................................................32
4.1. Xây dựng quy trình chuyển gen vào bèo tấm S. polyrrhiza..........................32
4.1.1. Chọn lọc chủng vi khuẩn thích hợp cho các thí nghiệm chuyển
gen ở bèo tấm SP nguyên cây và callus.......................................................32
4.1.2 Ảnh hưởng của mật độ vi khuẩn tới tỷ lệ biểu hiện tạm thời của
gen gus ở SP nguyên cây và callus.....................................................................34
4.1.3.Ảnh hưởng của thời gian ly tâm chân không tới tỷ lệ biểu hiện tạm
thời của gen gus ở SP nguyên cây và callus.......................................................35
4.1.4. Ảnh hưởng của hàm lượng AS tới tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen
gus ở bèo tấm SP nguyên cây và callus...............................................................36
4.2. Chuyển gen bền vững vào callus bốo tấm Spirodela polyrrhiza
thụng qua vi khuẩn Agrobacterium.......................................................................39
4.2.1. Kết quả nuôi cấy phục hồi sau khi đồng nuôi cấy...................................39
4.2.2. Kết quả chọn lọc sau diệt khuẩn...............................................................39
4.2.3. Kết quả tách chiết DNA và phân tích PCR các dòng bèo
tấm chuyển gen...................................................................................................42
PHẦN V : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ.................................................................44
5.1. Kết luận..........................................................................................................44
5.2. Đề nghị...........................................................................................................45
TÀI LIỆU THAM KHẢO.................................................................
1.2. Mục đích của đề tài
Xõy dựng quy trỡnh chuyển gen vào callus và bèo tấm nguyên cây Spirodela polyrrhiza thông qua Agrobacterium tumefaciens .
1.3. í nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
*Ý nghĩa khoa học: Kết quả của đề tài sẽ cung cấp những dẫn liệu khoa học về khả năng tiếp nhận gen từ Agrobacterium tumefaciens vào loài bèo tấm Spirodela polyrrhiza.
* Ý nghĩa thực tiễn: Là cơ sở ứng dụng để chuyển gen quan tâm vào bèo tấm Spirodela polyrrhiza nhằm sản xuất protein tái tổ hợp.
NỘI DUNG:
PHẦN I. MỞ ĐẦU.................................................................................................1
1.1. Đặt vấn đề.....................................................................................................1
1.2. Mục đích của đề tài.......................................................................................2
1.3. ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài..........................................2
PHẦN II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU.......................................................................4
2.1 Một số đặc điểm sinh học của bèo tấm Spirodela polyrrhiza.................. 4
2.1.1 Hệ thống phân loại......................................................................................4
2.1.2 Đặc điểm hình thái của bèo tấm..................................................................5
2.1.3 Phương thức sinh sản .................................................................................5
2.1.4 Phân bố của bèo tấm....................................................................................6
2.2. Các yếu tố môi trường nuôi cấy ảnh hưởng tới đời sống bèo tấm…..............7
2.3. Các phương pháp chuyển gen vào thực vật...............................................9
2.3.1. Phương pháp chuyển gen trực tiếp............................................................10
2.3.2. phương pháp chuyển gen gián tiếp...........................................................12
2.4. Chuyển gen gián tiếp nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens ...............12
2.4.1. Cấu trúc và chức năng của Ti-plasmid..............................................13
2.4.2. Cấu truc và chức năng của đạn T-DNA............................................14
2.4.3. Cơ chế phân tử của chuyển gen thông qua A.tumefaciens..................15
2.4.4. Hệ thống vectơ chuyển gen..............................................................16
2.5. Tình hình nghiên cứu xây dung hệ thống chuyển gen
vào bèo tấm...........................................................................................................18
2.5.1. Tình hình nghiên cứu thế giới.....................................................................18
2.5.2. Tình hình nghiên cứu trong nước................................................................20
PHẦN III : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU...........................22
3.1. Vật liệu nghiên cứu........................................................................................22
3.1.1. Vật liệu thực vật.........................................................................................22
3.1.2.Vật liệu vi khuẩn và plasmid......................................................................22
3.1.3. Hoá chất và máy móc thiết bị phục vụ cho nghiên cứu...........................23
3.2. Phương pháp nghiên cứu................................................................................24
3.2.1. Xây dựng hệ thống chuyển gen vào bốo tấm S. polyrrhiza......................24
3.2.2. Quan sỏt và xỏc định tỷ lệ biểu hiện tạm thời gen gus……………..…...27
3.2.3. Phương pháp tách chiết DNA bèo tấm……………………………….…27
3.2.4. Phương phỏp phõn tớch PCR…………………………………………….28
3.3. Nội dung nghiên cứu..................................................................................... 29
3.4. Các chỉ tiêu đánh giá......................................................................................31
PHẦN IV : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN...........................................................32
4.1. Xây dựng quy trình chuyển gen vào bèo tấm S. polyrrhiza..........................32
4.1.1. Chọn lọc chủng vi khuẩn thích hợp cho các thí nghiệm chuyển
gen ở bèo tấm SP nguyên cây và callus.......................................................32
4.1.2 Ảnh hưởng của mật độ vi khuẩn tới tỷ lệ biểu hiện tạm thời của
gen gus ở SP nguyên cây và callus.....................................................................34
4.1.3.Ảnh hưởng của thời gian ly tâm chân không tới tỷ lệ biểu hiện tạm
thời của gen gus ở SP nguyên cây và callus.......................................................35
4.1.4. Ảnh hưởng của hàm lượng AS tới tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen
gus ở bèo tấm SP nguyên cây và callus...............................................................36
4.2. Chuyển gen bền vững vào callus bốo tấm Spirodela polyrrhiza
thụng qua vi khuẩn Agrobacterium.......................................................................39
4.2.1. Kết quả nuôi cấy phục hồi sau khi đồng nuôi cấy...................................39
4.2.2. Kết quả chọn lọc sau diệt khuẩn...............................................................39
4.2.3. Kết quả tách chiết DNA và phân tích PCR các dòng bèo
tấm chuyển gen...................................................................................................42
PHẦN V : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ.................................................................44
5.1. Kết luận..........................................................................................................44
5.2. Đề nghị...........................................................................................................45
TÀI LIỆU THAM KHẢO.................................................................
%20(1).png "Hướng dẫn download ti liệu")
.png "Hướng dẫn download ti liệu")
%20(1).png "Gói VIP Member EBOOKBKMT - Hỗ trợ tài liệu nhanh nhất, ưu tiên cho thành viên VIP (Update 2025)")
Không có nhận xét nào: