Nghiên cứu đặc điểm hình thái và xác định một số trình tự gen phân loại cây Sói rừng (Sarcandra glabra)

Theo đánh giá của Tổ chức Y tế Thế giới, bệnh ung thư hiện nay luôn là gánh nặng của nền kinh tế - xã hội đối với mọi quốc gia, trung bình mỗi năm có thêm 10 - 16 triệu người mắc bệnh. Đây là một căn bệnh nguy hiểm, có tỷ lệ tử vong cao. Mặc dù hiện nay đã có rất nhiều phương pháp điều trị
hiện đại nhằm loại bỏ khối u như phương pháp xạ trị, hóa trị, liệu pháp hormon, liệu pháp sinh học, điều trị trúng đích và ghép tế bào gốc để ức chế và tiêu diệt tế bào ung thư. Ngoài ra, người bệnh còn phải sử dụng các thuốc nhằm nâng cao thể trạng, khắc phục hậu quả do khối u gây ra, kéo dài thời
gian sống cho người bệnh. Tuy nhiên, phương pháp này rất tốn kém về mặt kinh tế [3], [9].


NỘI DUNG:

Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ................................................................ 3
1.1. Tổng quan về cây sói rừng .......................................................................3
1.1.1. Phân loại học ......................................................................................... 3
1.1.2. Thành phần hóa học của cây sói rừng ................................................. 4
1.1.3. Tác dụng sinh học của cây sói rừng .................................................... 4
1.2. Tổng quan về mã vạch DNA....................................................................7
1.2.1. Giới thiệu về DNA Barcode ................................................................ 7
1.2.2. Các đặc điểm cơ bản của trình tự barcode .......................................... 8
1.2.3. Một số locus được sử dụng trong phương pháp DNA barcode
ở thực vật .......................................................................................................... 9
1.2.3.1. Trình tự gen nhân.................................................................................. 9
1.2.3.2. Vùng gen mã hóa ribosome ............................................................... 10
1.2.3.3. Trình tự gen lục lạp............................................................................. 10
1.3. Ứng dụng của mã vạch DNA trong nhận biết cây dược liệu ..................14
Chương 2:VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ....................... 18
2.1. Vật liệu nghiên cứu, hóa chất và thiết bị ...............................................18
2.1.1. Vật liệu thực vật .................................................................................. 18
2.1.2. Chủng vi khuẩn ................................................................................... 18
2.1.3. Hóa chất............................................................................................... 18
2.1.4. Thiết bị sử dụng .................................................................................. 19
2.1.5. Địa điểm nghiên cứu .......................................................................... 19
2.2. Phương pháp nghiên cứu ........................................................................19
2.2.1. Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái.................................... 19
2.2.2. Phương pháp sinh học phân tử........................................................... 20
2.2.2.2. Kiểm tra sản phẩm DNA sau khi tách chiết...................................... 21
2.2.2.3. Phương pháp nhân bản gen đích bằng kỹ thuật PCR ....................... 22
2.2.2.4. Tinh sạch sản phẩm PCR ................................................................... 24
2.2.2.5. Phản ứng ghép nối gen ngoại lai vào vector ..................................... 25
2.2.2.6. Biến nạp DNA plasmid vào tế bào E. coli bằng phương pháp sốc
nhiệt....... ............................................................................................................ 26
2.2.2.7. Phương pháp PCR trực tiếp từ khuẩn lạc (colony - PCR) ............... 26
2.2.2.8. Tách chiết plasmid từ tế bào E. coli .................................................. 28
2.2.2.9. Phương pháp xác định trình tự của gen ............................................. 29
2.2.2.10.
Phương pháp phân tích số liệu .................................................... 29
Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ........................................................ 30
3.1. Đặc điểm thực vật học của cây sói rừng thu tại Lạng Sơn ...................30
3.2. Phân lập gen từ mẫu cây sói rừng ..........................................................32
3.2.1. Tách chiết DNA tổng số..................................................................... 32
3.2.2. Khuếch đại vùng gen nghiên cứu bằng phản ứng PCR ................... 33
3.2.3. Kết quả ghép nối gen vào vector tách dòng ...................................... 35
3.2.4. Kết quả chọn dòng tế bào mang gen tái tổ hợp ................................ 36
3.2.5. Kết quả tách chiết plasmid tái tổ hợp ................................................ 37
3.3. Kết quả xác định trình tự đoạn các đoạn gen nghiên cứu.....................38
3.3.1. Phân tích trình tự đoạn gen rpoC1 ..................................................... 39
3.3.2. Phân tích vùng ITS ............................................................................. 42
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ......................................................................... 48

LINK DOWNLOAD

Theo đánh giá của Tổ chức Y tế Thế giới, bệnh ung thư hiện nay luôn là gánh nặng của nền kinh tế - xã hội đối với mọi quốc gia, trung bình mỗi năm có thêm 10 - 16 triệu người mắc bệnh. Đây là một căn bệnh nguy hiểm, có tỷ lệ tử vong cao. Mặc dù hiện nay đã có rất nhiều phương pháp điều trị
hiện đại nhằm loại bỏ khối u như phương pháp xạ trị, hóa trị, liệu pháp hormon, liệu pháp sinh học, điều trị trúng đích và ghép tế bào gốc để ức chế và tiêu diệt tế bào ung thư. Ngoài ra, người bệnh còn phải sử dụng các thuốc nhằm nâng cao thể trạng, khắc phục hậu quả do khối u gây ra, kéo dài thời
gian sống cho người bệnh. Tuy nhiên, phương pháp này rất tốn kém về mặt kinh tế [3], [9].


NỘI DUNG:

Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ................................................................ 3
1.1. Tổng quan về cây sói rừng .......................................................................3
1.1.1. Phân loại học ......................................................................................... 3
1.1.2. Thành phần hóa học của cây sói rừng ................................................. 4
1.1.3. Tác dụng sinh học của cây sói rừng .................................................... 4
1.2. Tổng quan về mã vạch DNA....................................................................7
1.2.1. Giới thiệu về DNA Barcode ................................................................ 7
1.2.2. Các đặc điểm cơ bản của trình tự barcode .......................................... 8
1.2.3. Một số locus được sử dụng trong phương pháp DNA barcode
ở thực vật .......................................................................................................... 9
1.2.3.1. Trình tự gen nhân.................................................................................. 9
1.2.3.2. Vùng gen mã hóa ribosome ............................................................... 10
1.2.3.3. Trình tự gen lục lạp............................................................................. 10
1.3. Ứng dụng của mã vạch DNA trong nhận biết cây dược liệu ..................14
Chương 2:VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ....................... 18
2.1. Vật liệu nghiên cứu, hóa chất và thiết bị ...............................................18
2.1.1. Vật liệu thực vật .................................................................................. 18
2.1.2. Chủng vi khuẩn ................................................................................... 18
2.1.3. Hóa chất............................................................................................... 18
2.1.4. Thiết bị sử dụng .................................................................................. 19
2.1.5. Địa điểm nghiên cứu .......................................................................... 19
2.2. Phương pháp nghiên cứu ........................................................................19
2.2.1. Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái.................................... 19
2.2.2. Phương pháp sinh học phân tử........................................................... 20
2.2.2.2. Kiểm tra sản phẩm DNA sau khi tách chiết...................................... 21
2.2.2.3. Phương pháp nhân bản gen đích bằng kỹ thuật PCR ....................... 22
2.2.2.4. Tinh sạch sản phẩm PCR ................................................................... 24
2.2.2.5. Phản ứng ghép nối gen ngoại lai vào vector ..................................... 25
2.2.2.6. Biến nạp DNA plasmid vào tế bào E. coli bằng phương pháp sốc
nhiệt....... ............................................................................................................ 26
2.2.2.7. Phương pháp PCR trực tiếp từ khuẩn lạc (colony - PCR) ............... 26
2.2.2.8. Tách chiết plasmid từ tế bào E. coli .................................................. 28
2.2.2.9. Phương pháp xác định trình tự của gen ............................................. 29
2.2.2.10.
Phương pháp phân tích số liệu .................................................... 29
Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ........................................................ 30
3.1. Đặc điểm thực vật học của cây sói rừng thu tại Lạng Sơn ...................30
3.2. Phân lập gen từ mẫu cây sói rừng ..........................................................32
3.2.1. Tách chiết DNA tổng số..................................................................... 32
3.2.2. Khuếch đại vùng gen nghiên cứu bằng phản ứng PCR ................... 33
3.2.3. Kết quả ghép nối gen vào vector tách dòng ...................................... 35
3.2.4. Kết quả chọn dòng tế bào mang gen tái tổ hợp ................................ 36
3.2.5. Kết quả tách chiết plasmid tái tổ hợp ................................................ 37
3.3. Kết quả xác định trình tự đoạn các đoạn gen nghiên cứu.....................38
3.3.1. Phân tích trình tự đoạn gen rpoC1 ..................................................... 39
3.3.2. Phân tích vùng ITS ............................................................................. 42
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ......................................................................... 48

LINK DOWNLOAD

Chuyên mục: D. Luận văn D. Luận văn chuyên ngành Nông lâm nghiệp (Agriculture and Forestry) D. Luận văn kỹ thuật